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保存：RT&-20℃

储存条件：酶2～8℃储存；酶解缓冲液和原生质体洗液常温保存。
产品组成：
产品简介：
本试剂盒主要通过纤维素酶和离析酶溶液消化猕猴桃细胞壁获得原生质体。
不同的猕猴桃种类，原生质体再生完整植株的能力不同，其分离所得原生质体的产量以及活力均有所不同。
选取合适的原生质体分离材料，获得数量多、质量高、活力强的原生质体是取得原生质体培养成功的重要前提之一。要获得高质量的原生质体，选用生长旺盛，增值能力强的组织作为初始分裂材料。猕猴桃的幼叶、悬浮细胞、愈伤组织等都是较为理想的材料。
本试剂盒包含原生质体分离全部试剂，按照每次20mL酶解液的使用量，可供5次/10次实验。
参考使用说明：
一、准备工作
1.需要准备的材料(本试剂盒不提供)：
锋利刀片；血球计数板；50mL离心管；2mL离心管
2.即用型酶解液配制
在20mL酶解缓冲液中加入0.4g纤维素酶R-10和0.1g离析酶R-10，55℃水浴10min，混匀溶解后用0.22μM滤器过滤除菌。(未用完的酶解液-20℃保存)
二、猕猴桃愈伤组织的酶解
1.将2g左右的3～4周龄的猕猴桃叶片愈伤组织转移到20mL即用型酶解液中，25℃摇床(3-40rmp/min)避光酶解8-10h。
三、原生质体的分离纯化
1.酶解完成以后，用200目(70μm)细胞筛过滤酶解产物。
2.用10mL CPW原生质体洗液冲洗酶解器皿和未解离的细胞组织2～3次，将所有液体收集到50mL离心管中。
注：操作过程中尽可能动作要轻柔，避免剧烈震荡，防止原生质体破碎。
3.960rmp离心5min，弃去上清液。用CPW原生质体洗液洗涤原生质体沉淀2～3次。
4.用原生质体培养基洗涤原生质体一次后，悬浮于原生质体培养基中。
5.用血球计数板统计每mL悬浮液中的原生质体数，并用FDA染色法进行原生质体的活性检测。
四、参考FDA染色方法：
1.取100μL纯化后的原生质体悬浮液加入2mL的离心管中，再加入2.4μL浓度为5mg/mL的FDA，黑暗下静置5min。
2.倒置显微镜下统计原生质体活力。统计10个视野求平均值，原生质体活力=发出绿色荧光的细胞/视野中原生质体总数×100%。
原生质体活力再80%以上才可以进行后续的培养。
注意事项：
1.分离制备的原生质体没有细胞壁的保护，非常脆弱，整个实验操作过程中动作尽可能的轻柔。
2.为了避免原生质体离心时贴在管壁，建议整个实验过程使用平角转头。
3.实验过程中尽可能使用剪尖蓝枪头(1mL吸头)，因为其尖端的孔径较大；或把黄色枪头的尖端剪掉，并保证平滑。
相关搜索：猕猴桃原生质体制备及转化试剂盒